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小鼠白細胞分化抗原4(CD4)elisa試劑盒

小鼠白細胞分化抗原4(CD4)elisa試劑盒
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  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2023-02-28
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產(chǎn)品詳情
品牌其他品牌貨號RQ-P-M0095
規(guī)格96T/48T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研試驗品牌瑞清
運輸順豐包郵檢測種屬人,小鼠,大鼠,植物,魚,蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細胞,土壤等動植物
售后專屬服務(wù)可售地全國

小鼠白細胞分化抗原4(CD4)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定ti,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,

組成結(jié)構(gòu)

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、2、血漿:EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟:

1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3、加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

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小鼠白細胞分化抗原4(CD4)elisa試劑盒

6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

7、每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。

8、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9、在450nm波長處測定各孔的OD值。

操作注意事項:

1、試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存

2、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6、底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

7、加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣ben稀釋ye40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

一般來講,96T能檢測90個樣本,48T能檢測42個樣本,這里面需要用標樣來做標準曲線,所以各位需要做實驗的老師們,請在購買ELISA試劑盒的時候注意,需要做多少個樣本,在決定買多大規(guī)格的試劑盒,以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費!






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